Producten

Serine / threonine-eiwitfosfatasen zijn in veel pathogene bacteriën beschreven als essentiële enzymen die betrokken zijn bij fosforylatie-afhankelijke signaaltransductieroutes en vaak worden geassocieerd met de virulentie van deze organismen.Een inspectie van het genoom van Mycoplasma synoviae onthulde de aanwezigheid van een gen (prpC) dat codeert voor een vermeend eiwitfosfatase van de eiwitfosfatase 2C (PP2C) subfamilie.Hier rapporteren we een volledige biochemische karakterisering van M. synoviae fosfatase (PrpC) en de specifieke rol van metaalionen in de structuur-functierelatie van dit enzym.Analyse van de aminozuursequentie van PrpC onthulde dat alle residuen die betrokken zijn bij het dinucleaire metaalcentrum en de vermoedelijke derde metaalion-coördinerende residuen, geconserveerd in PP2C-fosfatasen, aanwezig zijn in PrpC.PrpC is een monomeer eiwit dat in staat is om fosfo-substraten te defosforyleren met de afhankelijkheid van Mn(2+)-ionen.Thermische stabiliteitsanalyse toonde de enzymstabiliteit aan bij milde temperaturen en de invloed van Mn(2+)-ionen op deze eigenschap.Massaspectrometrische analyse suggereerde dat drie metaalionen binden aan PrpC, waarvan er twee een schijnbaar hoge affiniteitsconstante hebben.Mutatie-analyse van de vermeende derde metaal-coördinerende residuen, Asp122 en Arg164, onthulde dat deze varianten een zwakkere binding van mangaanionen vertoonden en dat beide mutaties de PrpC-fosfatase-activiteit beïnvloedden.Volgens deze resultaten is PrpC een metaalafhankelijk eiwitfosfataselid met een verbeterde stabiliteit in de holovorm en met Asp122, mogelijk betrokken bij de derde metaalbindingsplaats, essentieel voor katalytische activiteit.