Producten

Nucleaire accumulatie van een gemuteerde vorm van het nucleaire eiwit Lamin-A, genaamd Progerin (PG) of Lamin AΔ50, komt voor bij Hutchinson-Gilford Progeria Syndrome (HGPS) of Progeria, een versnelde verouderingsziekte.Een van de belangrijkste symptomen van deze genetische aandoening is een verlies van onderhuids vet als gevolg van een dramatische lipodystrofie. We hebben op stabiele wijze de expressie van menselijke PG en GFP -Green Fluorescent Protein- als controle in 3T3L1-cellen geïnduceerd met behulp van een lentiviraal systeem om de effect van PG-expressie op het differentiatievermogen van deze cellijn, een van de meest gebruikte adipogene modellen.Quantitative proteomics (iTRAQ) werd gedaan om het effect van de PG-accumulatie te bestuderen.Verschillende van de gemoduleerde eiwitten werden gevalideerd door immunoblotting en real-time PCR.De mitochondriale functie werd geanalyseerd door meting van a) de mitochondriale basale activiteit, b) de productie van superoxide-anionen en c) de individuele efficiëntie van de verschillende complexen van de ademhalingsketen. We ontdekten dat overexpressie van PG door lentivirale genafgifte leidt tot een afname van de proliferatiesnelheid en tot defecten in adipogene capaciteit in vergelijking met de controle.Kwantitatieve proteomics-analyse toonde 181 eiwitten die significant (p<0,05) gemoduleerd waren in preadipocyten die PG tot expressie brengen.De mitochondriale functie is aangetast in cellen die PG tot expressie brengen.We hebben met name een toename van de activiteit van het complex I en een overproductie van Superoxide-anion gedetecteerd.Incubatie met reactieve zuurstofspecies (ROS)-wegvangermiddelen leidt tot een afname van autofagische proteolyse, zoals blijkt uit de LC3-II/LC3-I-verhouding. PG-expressie in 3T3L1-cellen bevordert veranderingen in verschillende biologische processen, waaronder structuur van cytoskelet, lipidenmetabolisme, calcium regulatie, translatie, eiwitvouwing en energieopwekking door de mitochondriën.Onze gegevens versterken de bijdrage van ROS-accumulatie aan het vroegtijdige verouderingsfenotype en leggen een verband tussen mitochondriale disfunctie en verlies van proteostase bij HGPS.