Producten

Een van de factoren die de klinische toepassing van regeneratieve geneeskunde op degeneratieve kraakbeenaandoeningen verhindert, is een geschikte bron van cellen.Chondrocyten, het enige celtype van kraakbeen, in vitro gekweekt onder kweekomstandigheden om het aantal cellen uit te breiden, verliezen hun fenotype samen met het vermogen om hyalien kraakbeenweefsel te genereren.In deze studie stellen we vast dat een serum- en groeifactorvrij driedimensionaal (3D) kweeksysteem het vermogen van de gepasseerde chondrocyten herstelt om in vitro kraakbeenweefsel te vormen, een proces waarbij sox9 betrokken is. Articulaire chondrocyten van runderen werden tweemaal gepasseerd om zorgen voor uitbreiding van het aantal cellen (P2) en gekweekt met hoge dichtheid op 3D-collageen-type-II-gecoate membranen in media met een hoog glucosegehalte aangevuld met insuline en dexamethason (SF3D).De cellen werden gekarakteriseerd na monolaagexpansie en na 3D-cultuur door flowcytometrie, genexpressie en histologie.De vroege veranderingen in signaaltransductieroutes tijdens redifferentiatie werden gekarakteriseerd. De P2-cellen vertoonden een voorloperachtig antigeenprofiel van 99% CD44(+) en 40% CD105(+) en een genexpressieprofiel dat doet denken aan interzonecellen.P2 in SF3D bracht chondrogene genen en geaccumuleerde extracellulaire matrix tot expressie.Downregulatie van de insulinereceptor (IR) met HNMPA-(AM3) of de PI-3/AKT-kinaseroute (geactiveerd door insulinebehandeling) met Wortmannine remde de collageensynthese.HNMPA- (AM3) verminderde de expressie van Col2-, Col11- en IR-genen, evenals Sox6 en -9.Co-immunoprecipitatie- en chromatine-immunoprecipitatieanalyses van met HNMPA-(AM3) behandelde cellen toonden binding van de co-activatoren Sox6 en Med12 met Sox9 maar verminderde Sox9-Col2a1-binding. We beschrijven een nieuwe kweekmethode die een toename van het aantal chondrocyten mogelijk maakt en bevordert hyaline-achtige kraakbeenweefselvorming gedeeltelijk door insuline-gemedieerde Sox9-Col2a1-binding.De geschiktheid van het via deze benadering gegenereerde weefsel voor gebruik bij gewrichtsherstel moet in vivo worden onderzocht.