Producten

De membraantopologie van het colicine E1-kanaaldomein werd bestudeerd door middel van fluorescentie-resonantie-energieoverdracht (FRET).De FRET betrof een genetisch gecodeerd fluorescerend aminozuur (cumarine) als donor en een selectief gemerkt cysteïneresidu gebonden met DABMI (4-(dimethylamino)fenylazofenyl-4'-maleïmide) als FRET-acceptor.Het fluorescerende coumarineresidu werd in het eiwit opgenomen via een orthogonaal tRNA/aminoacyl-tRNA-synthetasepaar dat selectieve opname in elke plaats binnen het colicinekanaaldomein mogelijk maakte.Elke variant bevatte een stop (TAG) mutatie voor coumarine-opname en een cysteïne (TGT) mutatie voor DABMI-aanhechting.Zes interhelicale afstanden binnen helices 1-6 werden bepaald met behulp van FRET-analyse voor zowel de oplosbare als membraangebonden toestanden.De FRET-gegevens toonden grote veranderingen in de interhelicale afstanden tussen helices 3-6 bij membraanassociatie, wat nieuw inzicht opleverde in de membraangebonden structuur van het kanaaldomein.Over het algemeen namen de coumarine-DABMI FRET interhelicale efficiënties af na membraanbinding, voortbouwend op het overkoepelende model voor het colicinekanaal.Een voorlopig model voor de gesloten toestand van het kanaaldomein is ontwikkeld op basis van huidige en eerder gepubliceerde FRET-gegevens.Het model suggereert een cirkelvormige opstelling van helices 1-7 met de klok mee vanaf de extracellulaire zijde en membraan-grensvlakassociatie van helices 1, 6, 7 en 10 rond de centrale transmembraan haarspeld gevormd door helices 8 en 9.