Producten

X-gal (ook afgekort als BCIG voor 5-broom-4-chloor-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) is een organische verbinding die bestaat uit galactose gekoppeld aan een gesubstitueerd indool.De verbinding werd in 1964 gesynthetiseerd door Jerome Horwitz en medewerkers. De formele chemische naam wordt vaak afgekort tot minder nauwkeurige maar ook minder omslachtige uitdrukkingen zoals broomchloorindoxygalactoside.De X van indoxyl kan de bron zijn van de X in de X-gal samentrekking.X-gal wordt vaak gebruikt in de moleculaire biologie om te testen op de aanwezigheid van een enzym, β-galactosidase, in plaats van zijn gebruikelijke doelwit, een β-galactoside.Het wordt ook gebruikt om de activiteit van dit enzym in histochemie en bacteriologie te detecteren.X-gal is een van de vele indoxyglycosiden en esters die onoplosbare blauwe verbindingen opleveren die vergelijkbaar zijn met indigokleurstof als gevolg van enzymgekatalyseerde hydrolyse.

X-gal is een analoog van lactose en kan daarom worden gehydrolyseerd door het β-galactosidase-enzym dat de β-glycosidische binding in D-lactose splitst.X-gal levert, wanneer het wordt gesplitst door β-galactosidase, galactose en 5-broom-4-chloor-3-hydroxyindool-1 op. Dit laatste dimeriseert vervolgens spontaan en wordt geoxideerd tot 5,5'-dibroom-4,4'-dichloor -indigo - 2, een intens blauw product dat onoplosbaar is.X-gal zelf is kleurloos, dus de aanwezigheid van een blauw gekleurd product kan daarom worden gebruikt als test voor de aanwezigheid van actieve β-galactosidase.Hierdoor kan ook bacterieel β-galactosidase (het zogenaamde lacZ) worden gebruikt als een reporter in verschillende toepassingen.

Bij twee-hybride analyse kan β-galactosidase worden gebruikt als een reporter om eiwitten te identificeren die met elkaar interageren.Bij deze methode kunnen genoombibliotheken worden gescreend op eiwitinteractie met behulp van gist of een bacterieel systeem.Waar er een succesvolle interactie is tussen eiwitten die worden gescreend, zal dit resulteren in de binding van een activeringsdomein aan een promotor.Als de promotor is gekoppeld aan een lacZ-gen, zal de productie van β-galactosidase, die resulteert in de vorming van blauwgepigmenteerde kolonies in aanwezigheid van X-gal, daarom wijzen op een succesvolle interactie tussen eiwitten.Deze techniek kan beperkt zijn tot het screenen van bibliotheken met een grootte van minder dan ongeveer 106. De succesvolle splitsing van X-gal veroorzaakt ook een merkbaar vieze geur als gevolg van de vervluchtiging van indool.

Aangezien X-gal zelf kleurloos is, kan de aanwezigheid van een blauw gekleurd product worden gebruikt als test voor de aanwezigheid van een actieve β-galactosidase.

Door deze gemakkelijke identificatie van een actief enzym kan het gen voor βgalactosidase (het lacZ-gen) worden gebruikt als een reportergen in verschillende toepassingen.