Producten

Net als bij andere positiefstrengige RNA-virussen, worden tombusvirussen gerepliceerd door het membraangebonden virale replicasecomplex (VRC).De VRC bestaat uit het door p92-virus gecodeerde RNA-afhankelijke RNA-polymerase (RdRp), de virale p33-RNA-chaperonne en verschillende gecoöpteerd gastheereiwitten.Om na de translatie een functionele RdRp te worden, moet het p92-replicatie-eiwit in de VRC worden opgenomen, gevolgd door de activering ervan.We hebben eerder aangetoond in een celvrije test op basis van gistextract dat de activering van het Tomato bushy stunt virus (TBSV) RdRp een oplosbare gastheerfactor(en) vereist.In dit artikel identificeren we het cellulaire hitteschok-eiwit 70 (Hsp70) als de gecoöpteerd gastheerfactor die nodig is voor de activering van een N-terminaal afgeknotte recombinante TBSV RdRp.Bovendien remt op kleine moleculen gebaseerde blokkering van de Hsp70-functie de RNA-synthese door het tombusvirus RdRp in vitro.Verder laten we zien dat neutrale fosfolipiden, namelijk fosfatidylethanolamine (PE) en fosfatidylcholine (PC), de activering van RdRp in vitro versterken.Fosfatidylglycerol (PG) daarentegen vertoont een sterk en dominant remmend effect op in vitro RdRp-activering.We tonen ook aan dat PE en PC RdRp-virale plus-streng RNA [(+)RNA]-interactie stimuleren, terwijl PG de binding van het virale RNA aan de RdRp remt.Op basis van de stimulerende versus remmende rol van verschillende fosfolipiden bij tombusvirus RdRp-activering, stellen we voor dat de lipidesamenstelling van gerichte subcellulaire membranen door tombusvirussen kan worden gebruikt om nieuwe VRC-assemblage tijdens de infectie te reguleren. Het virusgecodeerde RNA-afhankelijke RNA-polymerase (RdRp), dat verantwoordelijk is voor het synthetiseren van het virale RNA-nageslacht in geïnfecteerde cellen van verschillende positiefstrengige RNA-virussen, is aanvankelijk inactief.Deze strategie vermijdt waarschijnlijk virale RNA-synthese in het cytosol die snel zou leiden tot inductie van door RNA getriggerde cellulaire antivirale reacties.Tijdens de assemblage van het membraangebonden replicasecomplex wordt de virale RdRp geactiveerd door een onvolledig begrepen proces dat de RdRp in staat stelt tot RNA-synthese.Door TBSV RdRp te gebruiken, laten we zien dat de gecoöpteerd cellulaire Hsp70-chaperonne en neutrale fosfolipiden RdRp-activering in vitro vergemakkelijken.Fosfatidylglycerol (PG) heeft daarentegen een dominant remmend effect op in vitro RdRp-activering en RdRp-virale RNA-interactie, wat suggereert dat het vliezige microdomein rond de RdRp het vermogen tot RNA-synthese sterk beïnvloedt.De activering van de virale RdRp hangt dus waarschijnlijk af van meerdere gastheercomponenten in geïnfecteerde cellen.