Producten

We hebben een nieuw afgiftesysteem voor klein interfererend RNA (siRNA) ontwikkeld met behulp van een ternair complex met polyethyleenimine (PEI) en γ-polyglutaminezuur (γ-PGA), dat een silencing-effect en geen cytotoxiciteit vertoonde.De binaire complexen van siRNA met PEI hadden een deeltjesgrootte van ongeveer 73-102 nm en een ζ-potentiaal van 45-52 mV.Het silencing-effect van siRNA/PEI-complexen nam toe met een toename van PEI, en siRNA/PEI-complexen met een ladingsverhouding van meer dan 16 vertoonden een significante knockdown van luciferase in een coloncarcinoomcellijn van muizen die regelmatig luciferase tot expressie bracht (Colon26/Luc-cellen).Er werden echter sterke cytotoxiciteit en bloedagglutinatie waargenomen in het siRNA/Lipofectamine-complex en het siRNA/PEI16-complex.Het opladen van kationische complexen met een anionische verbinding zou een veelbelovende methode zijn om deze toxiciteit te overwinnen.Daarom hebben we ternaire complexen van siRNA met PEI (ladingsverhouding 16) bereid door toevoeging van γ-PGA om de cytotoxiciteit te verminderen en siRNA af te leveren.Zoals verwacht nam de cytotoxiciteit van de ternaire complexen af ​​met een toename van het γ-PGA-gehalte, waardoor het ζ-potentieel van de complexen afnam.Een sterk silencing-effect dat vergelijkbaar is met het siRNA/Lipofectamine-complex werd ontdekt in ternaire complexen, waaronder γ-PGA met een anionische oppervlaktelading.De hoge opname van ternaire complexen in Colon26/Luc-cellen werd bevestigd met fluorescentiemicroscopie.Nadat een exogeen getransfecteerd gen was uitgeschakeld, werd het vermogen van het complex om knockdown van een endogeen huishoudgen, glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH), te mediëren, beoordeeld in B16-F10-cellen.Het ternaire complex (siRNA/PEI16/γ-PGA12-complex) vertoonde een significant GAPDH-knockdown-effect.Zo hebben we een bruikbaar siRNA-afgiftesysteem ontwikkeld.